Læknaneminn - 01.04.2007, Page 119

Rannsóknarqrein
Mótefnalitanir
Örvun Ósérhæfðar ES frumur Sérhæfðar ES frumur (hjartavöðvafrumurl
BMP - Id1 - Oct4 Idl - a-actinin
TGF(5 - Smad2 - Oct4 Smad2 - a-actinin
Activin -* Smad2 - Oct4 Smad2 - a-actinin
Tafla 4
NiðurstöÖur
Vel gekk að rækta stofnfrumur með ofangreindum
aðferðum. Alls voru útbúnir 108 EB sem voru örvaðir með
mismunandi vaxtarþáttum og myndaðir í Confocal
leysismásmjá. Hver litun var endurtekin a.m.k. í þrígang á
rannsóknartímabilinu.
Mótefnalitanir
Dæmi um sýni sem litast jákvætt fyrir FITC og Cy3. Sýni
voru unnin á þann hátt að bylgjulengdir voru aðgreindar
fyrir hvern lit og síðan skeytt saman til að fá heildarmynd
(mynd 4).
Áðuren mótefnalitanirfóru fram voru lituð viðmiðunarsýni
m.t.t. sértækni mótefna og stillinga Confocal smásjár hvað
varðar greinanlegar bylgjulengdir. Til að ganga úr skugga
um að upphaflegar frumur væru í raun ósérhæfðar
stofnfrumur þá voru þær litaðar til að greina Oct4 m, sem
greinist eingöngu á ósérhæfðum frumum (mynd 5).
Mynd 4
A. Topro litar frumukjarna bláa
B. Cy3 litast með rauðum lit
C. FITC litast með grænum lit
D. Skörun á Cy3 og FITC verður gulleit
& 1
Mynd 5. Ósérhæfðar ES frumur litast jákvæðar fyrir
Oct4.
A JT Ifc, B
c D
r", i ■■
% '

Mynd 6. Hjartavöðvafrumur örvaðar með BMP4
A. Topro jákvæðir kjarnar
B. Idl jákvæðar frumur
C. Frumur litast jákvæðar fyrir a-actinin
D. Samsett mynd
Niðurstaðan er í örstuttu máli sú að mótefnalitanir gefa
til kynna að BMP hluti TGF-beta boðleiðarinnar er tjáður í
ferlinu þegar ósérhæfðar mES frumur sérhæfast í
hjartavöðvafrumur.
Umræða
Niðurstaða rannsóknarinnar er sú að mótefnalitanir gefa
til kynna að BMP boðleiðin sé virkjuð við myndun
hjartavöðvafrumna úr stofnfrumum úr fósturvísum músa.
Samspil ræktunarskilyrða og innanfrumuboðkerfa er þó
flókið og er nauðsynlegt að rannsaka málið frá öðrum
sjónarhornum til að hægt sé að slá því föstu að boðleiðin
sé sannarlega virkjuð, t.d. með western-blot rannsóknum
og greiningu RNA-þátta.
Á rannsóknartímabilinu komu fram sláandi svæði í
sumum ræktunarskálum. Athugun á takti/tíðni þeirra og
samanburður við niðurstöður mótefnalitana vekur í raun
upp fleiri spurningar en hún svarar. Erfitt reyndist að bera
saman tilvist sláandi hjartavöðvafruma við niðurstöður
Læknaneminn 2007 / / 9