Læknablaðið : fylgirit - 05.01.2015, Blaðsíða 51

X V I I V Í S I N D A R Á Ð S T E F N A H Í
F Y L G I R I T 8 2
LÆKNAblaðið/Fylgirit 82 2015/101 51
E 139 Samspil EGFL7 og miR-126 í stofnfrumum úr fósturvísum
manna
Anne Richter1, Arna Rún Ómarsdóttir1, Zophonías Oddur Jónsson2, Guðrún
Valdimarsdóttir1
1Lífefna- og sameindalíffræðstofu, læknadeild Háskóla Íslands, 2líf- og umhverfisvísindadeild
Háskóla Íslands
anner@hi.is
Inngangur: Epidermal growth factor–like domain 7 (EGFL7) er tjáð í stofn-
frumum úr fósturvísum manna (hES frumum) og æðaþelsfrumum sem
taka þátt í nýæðamyndun tengdri fósturþroskun manna eða sjúkdóm-
stengdri æðamyndun. Ennfremur þá hýsir EGFL7 genið microRNA
(miR), þ.e. miR-126 í innröð 7 sem er mjög vel varðveitt og líffræðilega
virkt. miR-126 er þekkt sem æðaþelssértækt miR sem er einkum tjáð í
æðaþelsfrumum og blóðmyndandi forverafrumum.
Efniviður og aðferðir: Til að rannsaka hlutverk EGFL7 í hES frumum,
var CRISPR tæknin notuð, sem er ný af nálinni, til að slá út EGFL7 genið
í hES frumum. Auk þess voru hES frumur sýktar með lentiveiruvektor
sem yfirtjáir miR-126 til að athuga samspil EGFL7 og miR-126.
Niðurstöður: Sértæku “guide RNA” og Cas9 ensími var skeytt inn í hES
frumur til að kljúfa tvíþátta DNA og gera atlögu að útröð 5 í EGFL7 gen-
inu. Stakar frumukóloníur uxu mjög hægt og sýndu breytta formgerð
frá villigerðarfrumum. Raðgreining, Western blot og ónæmislitanir voru
framkvæmdar til að staðfesta EGFL7 útslátt. Yfirtjáning í hES frumum
leiddi til aukinnar frumufjölgunar. Áhrif miR-126 á tjáningu EGFL7 og
æðaþelsmarkera var einnig athuguð í qPCR.
Ályktanir: Við höfum notað nýju CRISPR tæknina til að gera atlögu
að EGFL7 geninu í hES frumum. Þessi tækni býður upp á afkastamikla
aðferð í erfðatækni sem mætti nefna genaskurðlækningar. Niðurstöður
okkar benda sterklega til mikilvægs hlutverks EGFL7 og miR-126 í hES
frumufjölgun.
E 140 Small RNA sequencing of the breast epithelial stem cell line
D492 during branching and in EMT
Eiríkur Briem1, Bylgja Hilmarsdóttir1,2, Magnús Karl Magnússon1,2,3, Þórarinn
Guðjónsson1,2
1Stem Cell Research Unit, Biomedical Center, Faculty of Medicine, University of Iceland,
2Department of Laboratory Hematology, Landspítali University Hospital, 3Department of
Pharmacology & Toxicology, Faculty of Medicine, University of Iceland
eib13@hi.is
Introduction: The breast gland is composed of branching epithelial
ducts terminating in structures commonly referred to as the terminal
duct lobular units. The molecular mechanisms underlying branching
morphogenesis are tightly linked with epithelial to mesenchymal transi-
tion (EMT), a cellular mechanism seen in normal development, wound
healing and in cancer progression. Recently, microRNAs (miRNAs)
have emerged as key regulators of many developmental processes inc-
luding differentiation and EMT. Here we use the breast epithelial stem
cell line D492, which generates in vivo-like branching structures in 3D
culture and its mesenchyme-derivative D492M as a model to investigate
miRNA expression patterns during different stages of branching and
in EMT.
Methods and data: D492 and D492M were cultured in 3D matrigel
and RNA was isolated and small RNA libraries prepared. Sequencing
was performed using Illumina MiSeq and results were validated by
RT-qPCR. Lentiviral transfection was used for miRNA over-expression
followed by phenotypic analysis.
Results: Number of miRNAs are differentially expressed during
branching morphogenesis and in EMT. Selected differentially expressed
miRNAs were investigated further and over expressed in D492 and
D492M and changes in phenotype investigated. Some miRNAs showed
effects on phenotype while others had little or no effect.
Conclusions: Matrigel 3D cultures of D492 and D492M work well as a
model system to investigate differential expression of miRNAs during
branching morphogenesis and in EMT. By using this model, coupled
with small RNA sequencing, we were able to pinpoint interesting
miRNAs, which need further investigation and could be important in
development and disease.
E 141 Ánægja aðstandenda með umönnun á gjörgæsludeild:
Forprófun mælitækis
Ásta Hrönn Kristjánsdóttir1, Hanna Jóna Ragnarsdóttir1, Lovísa Baldursdóttir1,2,
Ásdís Guðmundsdóttir1,2, Herdís Sveinsdóttir1,2
1Hjúkrunarfræðideild Háskóla Íslands, 2Landspítala
asdisgu@landspitali.is
Inngangur: Einn af gæðavísum gjörgæsludeilda er ánægja aðstandenda
með þjónustuna. Mikilvægt er að mæla hana með staðfærðum mæli-
tækjum en slíkt mælitæki er ekki til hér á landi.Markmið rannsóknar-
verkefnisins var að þýða, staðfæra og forprófa mælitækið: Ánægja
aðstandenda með umönnun á gjörgæsludeild (e. Family Satisfaction
with Care in the Intensive Care Unit, FS-ICU (24)) á gjörgæsludeildum
Landspítala og nota niðurstöður forprófunar til að meta notagildi þess
við íslenskar aðstæður.
Efniviður og aðferðir: Við þýðingu mælitækis á íslensku var stuðst við
aðferðafræði MAPI-rannsóknarstofnunarinnar. Þýðingunni var skipt í
fjögur skref, frumþýðingu, bakþýðingu, forprófun og prófarkalestur.
Forprófun mælitækis fór fram í apríl 2014. Stuðst var við hentugleikaúr-
tak þar sem leitað var eftir þátttöku 12 aðstandenda sjúklinga sem lágu
inni lengur en 48 klukkustundir á gjörgæsludeildum Landspítalans við
Hringbraut og í Fossvogi. Tölfræðiforritið SPSS var notað við úrvinnslu
gagna.
Niðurstöður: Eftir að þýðingarferli lauk, innihélt mælitækið að lokum
35 spurningar og er það þrískipt. Spurningum í mælitækinu sem snúa
að aðstandendum sjúklinga sem deyja á gjörgæslu var sleppt í for-
prófun. Forprófun sýndi fram á að mælitækið felur í sér yfirborðsrétt-
mæti og innihaldsréttmæti, þar sem almennt gekk þátttakendum vel að
svara spurningum mælitækis og svör þátttakenda endurspeglaði efnið
sem mælitæki er ætlað að meta.
Ályktanir: Mælitækið hefur reynst vel í forprófun og gagnast vel við
íslenskar aðstæður. Hafin er framkvæmd á stærri rannsókn til að álykta
um ánægju aðstandenda með umönnun á gjörgæsludeild svo hægt
verði að nota niðurstöður til að bæta gæði þjónustunnar við gjörgæslu-
sjúklinga og aðstandendur þeirra.
E 142 Árangur bráðaskurðaðgerða vegna ósæðarflysjunar (tegund
A) á Íslandi 1992-2013
Inga Hlíf Melvinsdóttir1, Bjarni Agnarsson2, Þórarinn Arnórsson3, Gunnar Mýrdal3,
Tómas Guðbjartsson1,3, Arnar Geirsson3
1Læknadeild Háskóla Íslands, 2rannsóknastofu í meinafræði, 3hjarta- og lungnaskurðdeild
Landspítala
arnarge@landspitali.is
Inngangur: Ósæðarflysjun er lífshættulegur sjúkdómur með háa dánar-
tíðni. Einkenni ber oftast brátt að og sjúklingar þurfa á bráðaskurðað-